Separación de proteínas
Las transferencias Western son una técnica bioquímica que permiten a los científicos para medir la presencia y cantidad de proteínas específicas. Como explica MoelcularStation.com, la primera parte de una transferencia Western es separar las proteínas de la muestra. Estas proteínas se pueden obtener mediante la ruptura hacia abajo (de lisis) las células de una muestra de tejido, o pueden ser obtenidos mediante la adopción de ellos directamente de la sangre. Una vez se han obtenido las proteínas, el se puede separar utilizando una técnica llamada electroforesis, que separa las proteínas en función de su tamaño. La primera parte de la electroforesis es el tratamiento de todas las proteínas con un detergente, lo que ayuda a enderezar hacia fuera y también les da una carga eléctrica. A continuación, las proteínas se inyectan en un gel que tiene entonces una corriente eléctrica que pasa a través de él a lo largo. La corriente eléctrica hace que las proteínas para moverse a través del gel, ya que se cargan eléctricamente. proteínas más pequeñas se mueven más rápido a través del gel, que permite a las proteínas a ser dispersados en todo el gel basado en el tamaño.
Transferencia de membrana
Una vez que las proteínas se han extendido sobre el gel, se formarán pequeñas bandas horizontales que se asemejan a los peldaños de una escalera. Proteína de Thermo Fisher métodos de biblioteca explica que el siguiente paso es obtener las bandas de proteína del gel y a una membrana donde pueden ser analizados. Hay un número de maneras de mover las proteínas desde el gel sobre la membrana, pero el más comúnmente utilizado de nuevo implica una corriente eléctrica. En este caso, la corriente se ejecuta en un ángulo de 90 grados con respecto al plano de la gel, que hace que las proteínas se muevan a través del gel a una membrana que se coloca en la parte superior del gel. Este método es relativamente rápido y permite que las proteínas que se transferirán al mismo tiempo mantenerlos separados en función de su tamaño.
secante
La parte de "transferencia" de la transferencia Western utiliza anticuerpos. Los anticuerpos son proteínas que se producen por el sistema inmune. Las transferencias Western utilizan proteínas que están específicamente diseñados para unirse sólo a la proteína de interés (lo que la mancha está tratando de detectar). Por lo general, se utilizan dos tipos diferentes de anticuerpos. La membrana se expone a la primera anticuerpo (anticuerpo primario) que luego se unen sólo a la proteína de interés. La membrana se lava, dejando sólo el anticuerpo primario que se ha unido a las proteínas en la membrana. A continuación, la membrana se expone a un segundo anticuerpo (anticuerpo secundario) que se une al anticuerpo primario. Este anticuerpo secundario tiene una molécula fluorescente en un extremo que emite luz. Después de cualquier anticuerpo secundario no unido se aclara, un trozo de película fotográfica se coloca sobre la membrana. La parte fluorescente del anticuerpo secundario emitirá luz, que se mostrará como un espacio oscuro en la placa.