proteína de unión de MBP o maltosa se encuentra en las bacterias Escherichia coli, que es parte de la flora intestinal de humanos y animales. La purificación de MBP implica una serie de procedimientos destinados a la separación de los constituyentes de la proteína. En la biología molecular, la purificación MBP es un proceso vital para el estudio de la estructura y función de esta proteína. protocolos de purificación incluyen la purificación de MBP MBP fusionado proteínas, escala de fusión MBP pequeña y maltosa vinculante purificación etiqueta de la proteína de fusión.
MBP Fundida purificación de proteínas
Durante este protocolo, los técnicos se lavan 20 ml de la resina de amilosa polímero con solución ATRIS a pH 7,4, cloruro de sodio, mercaptoetanol (ME) y ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), de acuerdo con protocolos en línea. Se añaden muestras de células, se centrifugaron y se analizaron en electroforesis en gel. Las muestras también se analizaron en un cromatógrafo, donde los técnicos eluato u observar los componentes de la solución mientras que pasa a través de la columna de cromatografía.
Pequeña Escala Protein Purification de fusión MBP
De acuerdo con la Universidad Hebrea de Jerusalén, los biólogos utilizan el isopropílico reactivo BD-1-tiogalactopiranósido (IPTG), el cultivo de células de centrifugado durante 10 minutos a 8.000 revoluciones por minuto a 39,2 grados Fahrenheit. Más tarde, eliminar el líquido sobrenadante y se mezclan tampón PBS frío a la muestra, que se divide en varios tubos y se centrifugó de nuevo. Muestras se mantuvieron a -112 grados Fahrenheit para el análisis posterior.
La maltosa de unión a proteínas de fusión etiqueta de purificación
marcadores de afinidad están diseñados genéticamente moléculas empleadas en la biología molecular para detectar y purificar proteínas. Este protocolo es un conjunto complejo de procedimientos dividido en tres etapas, que incluyen la construcción de marcador de proteína de polihistidina (HisMBP); un experimento piloto para evaluar la solubilidad de la proteína; y la purificación a gran escala de moléculas de MBP, según Nature Protocols. Además de las muestras de E. coli, los técnicos utilizan ampicilina, kanamicina, IPTG, anhidrotetraciclina, monohidrato de glucosa, tampón de lisis celular, el ADN polimerasa, cebadores de PCR, Tris-acetato-EDTA y bromuro de etidio.