Los niveles elevados de pepsina en muestras de saliva o de esputo pueden indicar una enfermedad de reflujo gastro-esofágico y son útiles en el diagnóstico de esa condición. La pepsina es una hormona importante para la digestión de la proteína temprana en el estómago. Las células conocidas como célula principal secretan una forma inactiva de la pepsina. El ambiente ácido del estómago después activa la pepsina para descomponer proteínas grandes en unidades más pequeñas, conocidas como polipéptidos. La pepsina se inactiva en el intestino delgado menos ácido. Con el fin de medir los niveles de pepsina, se necesita un conocimiento básico de la preparación y el uso de geles de agarosa, así como el acceso de laboratorio.
Instrucciones
1 Obtener saliva o muestra de esputo que contiene pepsina escupiendo en una taza u otro recipiente. Si el uso de muestras de varias personas, utilizar la protección adecuada, incluyendo guantes y gafas de protección.
2 Preparar gel de agarosa que contiene fibrinógeno bovino. Utilice el método del Dr. Sunitha Potluri de la División de Gastroenterología y Enfermedades Pulmonares en el Hospital de la Universidad de Temple en Filadelfia y disolver agarosa al 1,25 por ciento en un 0,5 por ciento de solución salina normal y se calienta a 100 grados centígrados. A continuación, añadir fibrinógeno bovino para obtener una concentración de 1 mg / ml. Verter en molde de gel, y se deja enfriar.
3 gel de sumergirse en solución ácida, HCl 0,2 N como, para activar la pepsina.
4 Diluir saliva o esputo muestra con agua a 7 microlitros, y añadir a un lado de la gel. Además, añadir un control negativo con 7 microlitros de solución salina normal o agua para el otro lado del gel.
5 Coloque los geles en ambiente húmedo durante 12 horas, y observar para la limpieza de gel alrededor de la muestra. Esta compensación sugiere la escisión del fibrinógeno y la presencia de pepsina.
6 comparar cualitativamente la limpieza alrededor de la muestra de saliva a la de la compensación por el lado de control negativo. La compensación de la muestra debe ser mucho más grande en diámetro si la muestra contenía una alta concentración de pepsina. La compensación debe ser similar en tamaño a la de control negativo si contenía una baja concentración de pepsina.
Consejos y advertencias
- Durante este procedimiento, evitar el contacto excesivo de la piel con HCl.
- Si la solución salpica en los ojos, lavar con agua vigorosamente. Si se producen enrojecimiento, ardor o cambios en la visión, busque ayuda profesional.