Proteína medida expresión puede proporcionar pistas sobre la actividad de los genes en su cuerpo, ya que las proteínas funcionan como catalizador final de las actividades celulares. Sin embargo, según un artículo publicado en la edición de marzo de 2010 de "LabMedicine", patólogos y biólogos todavía están de acuerdo en la microscopía de campo claro o microscopía de fluorescencia como el método más adecuado para medir la expresión de proteínas. la exploración de campo claro de todo el portaobjetos no sólo es fácil de usar y proporciona estabilidad cromógeno, pero puede proteger portaobjetos de vidrio larga.
Instrucciones
1 Coloque el tejido de células en un portaobjetos y añadir un anticuerpo secundario biotinilado, seguido de una estreptavidina-peroxidasa de rábano picante y esperar dos minutos.
2 Vierta cuatro gotas de la 3,3'-diaminobencidina sobre la muestra y espere dos minutos para que la mancha marrón se extienda por completo de la muestra.
3 Coloque un corte histológico de la muestra teñidas en una plataforma motorizada en una habitación bien iluminada. Ajuste cuidadosamente la cámara de líneas de color a 20X o 40X y escanear la muestra. Alinear las rayas de la imagen y comprimir la imagen digital en un tamaño de archivo legible.
4 Imprimir la imagen de la digital para el análisis manual o alimentar la imagen en el software de computadora para el análisis de tecnología asistida. Observar el patrón de las manchas como se presenta en la imagen. analizar cuidadosamente la expresión de proteínas en base a los patrones de las manchas en la muestra.
5 Evaluar la expresión de la proteína en las células cancerosas y el estroma mediante el examen de la concentración de proteína expresada en el tejido celular.
6 Use los patrones de color para cuantificar la expresión de la proteína en una escala de 0 a 3+. Utilice la puntuación para calcular la puntuación de HER-o la puntuación Allred.
Consejos y advertencias
- Una precipitación de color marrón indica una proteína particular de interés, mientras que una mancha de color marrón oscuro indica la presencia de más proteínas.
- La expresión de proteínas se produce, ya sea en el núcleo o en el citoplasma.
- Las células con ninguna medida tinción de membrana cero; aquellos con membrana densa medida tinción 3+.
- membrana celular tiene una puntuación de HER-2.
- HER-puntuación indica cómo un paciente de cáncer reaccionaría al tratamiento.
- La correlación entre la proteína y la señal es no lineal.