Se encuentra en algunas bacterias y especies de levaduras, los plásmidos son comparativamente pequeños anillos, auto-replicantes de ADN situadas fuera del cromosoma principal de una célula. Son muy útiles en la ingeniería genética, ya que es relativamente fácil de empalmar genes seleccionados de otras especies en plásmidos, transferirlos entre células huésped de la misma o diferentes especies, y estimularlas para replicar - o propagar - en mucho más alta de lo -Normal - o amplificados - tarifas. Los plásmidos recombinantes son simplemente aquellos que han sido diseñados para contener genes de otras especies. Especialmente con la propagación amplificado, los plásmidos recombinantes pueden más rápida y fácilmente expresar proteínas deseada en una escala grande, industrial.
Instrucciones
1 Elija el procedimiento o procedimientos de amplificación que mejor se adapte a su plásmido y anfitrión organismo recombinante específica. Algunos procedimientos funcionan mejor con ciertos plásmidos y anfitriones que con otros. Si está trabajando con una novela, plásmido recombinante aún experimental y, o están tratando de entrada / salida a diferentes especies huésped, puede que tenga que determinar el mejor proceso de amplificación o procesos a través de ensayo y error.
2 Prueba el proceso llamado transformación si sus especies de plásmidos y de la célula huésped específicas podrían responder a ella. Chill las células y los plásmidos a cero grados C en una solución de cloruro de calcio (CaCl). elevar rápidamente la temperatura de 37-43 grados C. Este cambio brusco de temperatura provoca las membranas celulares para tomar grandes cantidades de plásmido.
3 Enviar pulsos de alta tensión a través de la solución de plásmidos y células si la electroporación es el método de amplificación deseada. Esta técnica aumenta la permeabilidad de la membrana celular a los plásmidos.
4 Exponer el cultivo de células huésped a niveles bajos de la cloranfenicol antibiótico para generar tantos como cien plásmidos por célula. Este método suprime la replicación de los principales cromosomas de las células huésped ', mientras que la inducción de la replicación no controlada del plásmido, que incluye el gen cortado y empalmado en ella.
5 Aplicar la reacción en cadena de la polimerasa o PCR método para generar copias de plásmido a muy altas órdenes de magnitud. PCR se basa en la polimerización de ADN, la reacción química a través del cual las secuencias genéticas se forman en la naturaleza. PCR es más a menudo catalizada por una enzima termoestable llamada la Taq polimerasa, extraído de una especie bacteriana que vive en aguas termales.
Consejos y advertencias
- Como lo ha hecho desde la década de 1980, el conocimiento de las técnicas de ingeniería genética continúa creciendo rápidamente. Revisión de la literatura científica y protocolos de laboratorio existentes para ver si hay nuevas técnicas de amplificación mejor se adapte a sus propósitos.