Cebolla (Allium cepa) se utilizan para evaluar los riesgos ambientales al permitir que las raíces en desarrollo que entran en contacto con las sustancias a ensayar. Después de una exposición suficiente, las raíces se sacan, se tiñen y se maceran por lo que los cromosomas de células se pueden ver con un microscopio óptico. La toxicidad se pone de manifiesto si se detectan anomalías cromosómicas o anomalías de la división celular. puntas de las raíces se utilizan porque las células no están creciendo y dividiendo activamente, dando una buena oportunidad de ver los cromosomas durante las diferentes etapas de la división celular.
Instrucciones
Preparación de la prueba
1 Retire la piel seca exterior de 12 cebollas. Raspar la parte inferior de la cebolla alrededor de las placas de fondo sin dañar el área de la que surgirán las raíces.
2 Seleccione vasos de precipitados que tienen una boca lo suficientemente amplia como para sostener la parte inferior de la cebolla inmersos en los líquidos de ensayo. Llenar los vasos con agua destilada y colocar la cebolla en los vasos en contacto con el agua. Escudo de los lados de los vasos de precipitados con papel de aluminio para simular la oscuridad bajo tierra. Cambiar el agua diariamente.
3 Examine las bases de cebolla después de dos días. Las raíces deben haberse formado. Evaluar el crecimiento de las raíces y deseche los dos cebollas con el crecimiento de las raíces más débil.
4 Puesta en funcionamiento una segunda serie de cinco vasos de precipitados conteniendo cada uno una muestra del material a ensayar, tales como aguas residuales o desechos industriales. Ponga cinco de las cebollas en estos vasos. Conservar los otros cinco en agua destilada como controles de prueba. Permitir que las raíces crezcan durante otras 24 horas.
Preparación de las Raíces
5 Con un bisturí o cuchilla de afeitar, la cosecha de cinco a seis puntas de las raíces de cada cebolla, la grabación que eran controles y cuáles eran los sujetos de prueba. Mantener las raíces de cebolla individuales se separan en pequeños frascos etiquetados.
6 puntas de las raíces Fix inmediatamente en aceto-alcohol en una proporción de 1: 3. Colocar las puntas de las raíces de una cebolla en un portaobjetos de microscopio y macerar en ácido clorhídrico 1 N, que es el mismo como el ácido clorhídrico 1 molar, a 60 grados centígrados durante tres minutos. Stain consejos maceradas con mancha carbol fucsina, una mezcla de fenol y fucsina básica que se une a los elementos de las paredes celulares de manera que se hacen más visibles bajo el microscopio de luz.
7 Añadir un 2 por ciento mancha aceto-orceina en ácido acético al 4 por ciento. Esto influye en los cromosomas. Agitar con la varilla de maceración. Aplicar una hoja de cubierta, presionando hacia abajo para aplastar las puntas de las raíces. De cualquier sellar los bordes con de secado rápido el esmalte de uñas o permanentemente montar los preparativos en bálsamo de Canadá, la resina del árbol de abeto balsámico mezclado con cualquiera de los aceites esenciales o xileno. Número las diapositivas por lo que los resultados serán registrados pero no evidente si cada uno es un sujeto de prueba o un control.
resultados de grabación
8 Coloque el portaobjetos de un microscopio en el escenario de un microscopio de luz. Examine el campo bajo un aumento menor, el cambio a mayores aumentos para examinar los cromosomas.
9 Registrar las aberraciones cromosómicas en una hoja de datos, registro de información por el número codificado para cada cebolla. Incluir los cromosomas separados de forma incompleta o rotas, micronúcleos (núcleos adicionales formadas cerca del final de la división celular que puede contener restos cromosómica), anillos de cromosomas y cromosomas pegajosas y perturbados en diferentes etapas de la división celular. Fotografiar cada diapositiva.
10 Analizar los datos mediante análisis estadístico. Interpretar los resultados para evaluar si es o no la solución de prueba es genotóxico.